补充资料：加减法

分子式：
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性质：一种测DNA序列的方法。桑格(Sanger)于1975年发明，使人们有可能第一次“读”出DNA的碱基序列。是成功地把片段长度和碱基位置联系起来的序列测定方法。此法以单链DNA为模板，加一个合适的引物(一般是用限制性内切酶的酶解片段)，再加入四种脱氧核糖核酸三磷酸(dNTP)，其中一种是同位素标记的。DNA聚合酶就从引物开始合成一条与模板互补的DNA链。对于DNA序列分析最理想的情况是，使合成反应进行的程度尽可能是随机的，就是使合成产物中各种长度的片段都存在。然后从反应混合物中除去四种dNTP反应产物，分成两部分，一部分用在加法系统，另一部分用在减法系统。用于加法系统的产物再分成四小份，每一小份中仅仅将四份中的dNTP的一种加入反应体系。比如仅加入dATP。由于DNA由聚合酶具有3′→5′的外切酶活性，而反应体系中缺少另外三种必要的dNTP，合成产物就从3′→5′方向降解。然而由于存在dATP，显然遇到dA的位置降解反应就停止了。因而所有的片段都是以A结尾的。同理，可以分别制备以C、G或T结尾的另外三组片段。四组片段在同一块凝胶板的不同样品槽中同时电泳，从放射自显图上就可以推断出碱基序列，因为从A样品槽查出的放射性区带代表A在片段中的位置，同理也可定出C、G和T的位置。按理只用一个加法系统就足以推断DNA的碱基序列了。但由于技术上的原因，只用一种方法有时不能得到完全正确的结果，因此又设计了一种减法系统。在减法系统中，也是将上述酶促产物分成四小份，每一小份中只加入三种dNTP，比如缺少dATP。在这个反应体系中，DNA聚合酶能够把片段继续合成下去，但是在遇到应该是dATP参入的位置时，合成反应就停下来了。这就可以得到一个都是以A前一个位置为结尾的片段组，电泳后同样可以定出A的位置。但此加减法并不尽如人意，由于反应速度上的差异，有些片段可能多些，另一些片段可能少些，有时可能导致漏读和重读，有时图谱上还会出现假谱线，当同样碱基排列时图谱上有时只出现一条带。因此用这个方法测定DNA片段可能有1/50的误差。目前常用的是它的改进法-双脱氧末端终止法。

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