重组人胰岛素

重组人胰岛素 重组人胰岛素 拼音名：Chongzu Ren Yidaosu 英文名：Recombinant Human Insulin 书页号：2000年版二部-497 C257H338N65O77S6 5807.69 本品为重组DNA技术生产的由51个氨基酸残基组成的蛋白质，宿主细胞为大肠杆菌。按干燥品计 算， 每1mg含重组人胰岛素不得少于27.5单位。 重组人胰岛素中残余宿主DNA和宿主细胞蛋白质为与生产过程相关的、潜在的特异性杂质，必须在 生 产过程中严格控制，其限度应符合有关规定。

本品为白色或类白色的结晶性粉末。 本品在水、乙醇和乙醚中几乎不溶，在稀盐酸和稀氢氧化钠溶液中易溶。

(1)在效价测定项下记录的色谱图中，供试品主峰的保留时间应与重组人胰岛素对照品 峰的保 留时间一致。 (2)取本品适量，用0.1％三氟醋酸溶液制成每1ml中含10mg的溶液，取20μl，加0.2mol/L三羟甲 基氨基 甲烷-盐酸缓冲液(pH7.3)20μl、0.1％V8酶溶液20μl与水140μl，混匀，置37℃水浴中2小时后，加磷酸 3μl，作为供试品溶液；另取重组人胰岛素对照品适量，同法制备，作为对照品溶液。照效价测定项下 的方法，以0.2mol/L硫酸盐缓冲液(pH2.3)-乙腈(90:10)为流动相A，乙腈-水(50:50)为流动相B，进 行梯度洗脱。 时间 流动相A 流动相B 0分 90％ 10％ 5分 80％ 20％ 45分 40％ 60％ 50分 40％ 60％ 取对照品溶液和供试品溶液各25μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品的肽图谱应与对照 品的 肽图谱一致。

有关物质 取本品适量，用0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml中含3.5mg的溶液，作为供试 品 溶液。照效价测定项下的方法，以0.2mol/L硫酸盐缓冲液(pH2.3)-乙腈(82:18)为流动相A，乙腈-水 (50:50)为流动相B，进行梯度洗脱。 时间 流动相A 流功相B 0分 78％ 22％ 36分 78％ 22％ 61分 33％ 67％ 67分 33％ 67％ 调节流动相比例使重组人胰岛素主峰的保留时间约为25分钟，系统适用性试验应符合效价测定项 下的 规定。取供试品溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按面积归一化法计算，总有关物质不得过 3.0％。 高分子蛋白质 取本品适量，用溶解液(取乙二胺四醋酸四钠300mg，加水250ml溶解后，加 0.1mol/L 盐酸溶液3ml，加水至500ml)制成每1ml中含1mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，用稀释液 (取乙 二胺四醋酸四钠600mg，加水900ml溶解后，用1mol/L盐酸溶液调节pH值至8.5，加水至1000ml)稀释成 每1ml中含0.01mg的溶液，作为对照溶液。照高效液相色谱法(附录Ⅴ D)测定，以适合分离分子量为 5000 ～60000球状蛋白的色谱用亲水硅胶为填充剂；0.4mol/L碳酸氢铵溶液-乙腈(69:31)为流动相；流速 为每 分钟0.5ml；检测波长为214nm。取人胰岛素单体-二聚体对照品，用乙二胺四醋酸溶解制成每1ml中含 1mg 的溶液，取20μl注入液相色谱仪，以人胰岛素单体和二聚体之间的峰谷高与二聚体峰高之比作为分离 度，分 离度应不大于0.6。取供试品溶液和对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液 色谱图 中显示的所有分子量大于重组人胰岛素单体的各峰面积之和，应不得大于对照溶液主峰的峰面积 (1.0％)。 锌 精密称取本品适量(约相当于锌0.1mg)，置10ml量瓶中，用0.01mol/L盐酸溶液溶解并稀释至 刻 度，作为供试品溶液；取供试品溶液与标准锌溶液(精密称取硫酸锌44mg，置100ml量瓶中，加水溶解 并稀 释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，每lml相当于10μg的Zn) 各 1.6ml，分别置10ml量瓶中，各加硼酸-氯化钠缓冲液(pH9.0)2ml与新制的锌试剂溶液(取锌试剂 0.13g，加 氢氧化钠试液2ml溶解后，加水使成100ml)1ml，加水稀释至刻度，摇匀，放置30分钟，照分光光度法 (附录 Ⅳ A)，在620nm的波长处分别测定吸收度，计算。含锌量不得过1.0％。 氯 取本品约10mg，精密称定，照氮测定法(附录Ⅶ D 第二法)测定，按干燥品计算，含氮量应 为 14.5％～16.5％。 干燥失重 取本品0.2g，在105℃干燥至恒重，减失重量不得过10.0％(附录Ⅷ L)。 炽灼残渣 取本品约0.4g，依法检查(附录Ⅷ N)，遗留残渣不得过2.0％。 无菌 取本品，加适量的灭菌0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml中含2mg的溶液，用薄膜过滤法处理 后， 依法检查(附录Ⅺ H)，应符合规定。 细菌内毒素 取本品，依法检查(附录Ⅺ E)，每1mg重组人胰岛素中含内毒素的量应小于10EU。

照高效液相色谱法(附录Ⅴ D)测定。 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(5～10μm)；0.2mol/L硫酸盐缓 冲液 (取无水硫酸钠28.4g，加水溶解后，加磷酸2.7ml、水800ml，用乙醇胺调节pH值至2.3，加水至 1000ml)-乙 腈(74:26，或适宜比例)为流动相；流速为每分钟1.0ml；柱温为40℃；检测波长为214nm。取系统适 用性试 验用溶液(取重组人胰岛素对照品，用0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml中含1mg的溶液，室温放置至少24 小时)注入液相色谱仪，胰岛素主峰和A21脱氨胰岛素峰之间的分离度应不小于1.8，拖尾因子应不大于 1.8。 测定法 取本品适量，精密称定，用0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml中含10.0单位的溶液(临用新 配)。取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取重组人胰岛素对照品适量，同法测定。按外标法以峰 面积 计算。

降血糖药。

遮光，密闭，在－15℃以下保存。

(1)重组人胰岛素注射液 (2)精蛋白重组人胰岛素注射液