1) isolated regeneration culture
离体再生培养
2) in vitro regenerative secondary culture
离体再生继代培养
4) regeneration culture system
再生培养体系
5) Regeneration culture
再生培养
6) in vitro direct regeneration of organs
离体培养中器官直接再生
补充资料:生物离体培养
生物离体培养 biological in-vitro culture 指细胞组织、器官在体外条件下的存活或生长的过程。在习惯使用上由于体外培养技术最初是从培养组织发展而来的,故往往用组织培养这一术语来泛指一切可以使细胞、组织、器官在适当的培养条件下离体生长的技术。 发展简史 动物离体培养的技术起源于19世纪所应用的若干胚胎学技术。1885年W.鲁把鸡胚的神经板在温热的盐水中成功地维持存活了若干天,是首次体外培养的尝试。1907年美国胚胎学家R.G.哈里森把蛙胚神经管的一小片组织移植到蛙的凝结的淋巴液中,在体外存活了苦干星期,还从中长出了轴突,表明了利用离体培养进行实验的可能性。随后,法国生物学家A.卡雷尔把外科无菌技术引进组织培养技术。随着抗菌素、合成培养液、胰蛋白酶处理技术的发展以及器皿的改进,动物离体培养技术得到了飞速的发展。 植物离体培养技术是从动物离体培养技术直接引申而来,在许多方面又迥然相异。1934年P.R.怀特第一次实现离体根在培养液中的生长,1946年罗士韦培养菟丝子茎类并观察到花的形成。有关植物激素的研究,有力推动了植物离体培养技术的发展。 组织培养和器官培养 动物组织培养与器官培养要求培养物保持一定程度的分化,为实验生物学提供处于一定的组织结构之中又脱离了体内种种复杂因素的细胞群体。但在经典的组织培养技术中,细胞常常从培养物中向外迁移,培养物很快便失去了它们的组织分化特性。采用把组织放置在细胞难以粘附的表面上,减少支持物与组织的接触面积,以及把组织包埋于琼脂中等方法,可以大大减少了细胞迁移,限制其生长,使器官专一细胞同它们的基质细胞维持相对正常的结构关系。在适当的条件下,胚胎器官培养物和癌瘤器官培养物能存活几个月,成体器官培养物能存活几个星期。动物组织培养和器官培养的方法很多,不论何种方法均只能进行原代培养,不能连续传代。它对研究分化、发育、免疫、癌变、癌的浸润转移,特别是不同组织及其成分之间的相互作用,有重要价值。 植物的组织培养和器官培养集中于研究如何控制愈伤组织的器官发生和胚胎发生,由于结合使用了生长素和细胞分裂素,不仅能诱导培养物产生愈伤组织,而且能发生根和芽的分化,再生完整植株。 细胞培养 细胞培养包括原代培养(包括从组织块开始的原代培养和从细胞悬液开始的原代培养)和传代培养。原代培养物在首次传代后即成为细胞系,而不问其是否能长期连续传代。能连续传代的细胞系可另称为连续性细胞系。在一个细胞系中,由于细胞来自原代培养物中的不同的细胞谱系,并非所有的细胞均具有相同的分化标志和特性。通过克隆形成法或各种选择培养法,有可能从原代培养物或细胞系中把那些具有共同特性或分化标志的细胞群体分离出来,形成细胞株。能连续传代的细胞株可另称为连续性细胞株。克隆又称无性繁殖系,系单个细胞通过有丝分裂所形成的细胞群体,是细胞株的特殊情形。一个克隆中的细胞在遗传性上不一定是均质的,如肿瘤细胞的克隆由于不均质分裂在遗传性上就是不均质的。 离体培养的细胞可分为两类,一类是以上皮细胞或类上皮细胞为代表的器官专一细胞(即器官实质细胞),一类是以成纤维细胞或成纤维样细胞为代表的间叶细胞。 无论上皮细胞或成纤维样细胞,无论其来源是正常组织或是肿瘤组织,在体外培养条件下,各种细胞可以变得在形态、代谢、功能、结构(特别是表面结构、细胞内骨架的分布以及气体交换的方式)等方面非常相似,致使彼此难以鉴别,任何培养细胞均倾向于去分化;细胞与细胞之间的相互作用有所减弱;生长能力、有丝分裂活动有所激发;细胞的活动能力、吞噬能力及胞饮能力则有所增强。一切得以传代的细胞株系,实际上都是经过选择的细胞群体。 动物细胞培养,作为一种重要的实验技术,在体细胞遗传、分化、胚胎发生,肿瘤,免疫等一系列领域发挥重要作用。以体细胞培养技术为基础发展起来的单克隆抗体技术成为一项重要的生物技术,取得一系列成果。植物细胞培养,通过原生质体的融合,开辟了体细胞杂交这一新的领域;借助花粉培养,取得单倍体植株,从而成为植物品种改革的有效的手段。培养基的选择和配制是体外培养技术的一个关键问题。动物组织培养基由3部分组成:基础培养基、血清和基质。①基础培养基。自行配制或现成的化学合成的基础培养基,具有适当的渗透压、能源、氨基酸、维生素、微量元素及缓冲pH值,可以满足许多类型培养细胞的最基本的需要,但缺乏细胞有丝分裂所必需的各种激素和生长因子。②血清。可以提供细胞生长所需的各种激素和生长因子,目前已成为维持细胞有丝分裂不可缺少的物质。但血清的易变性和非限定性,给实验工作带来了难以精确定量和难以重复等困难。无血清培养基(又称无血清限定培养基或简称限定培养基)已广泛应用和发展。这类培养基主要以各种激素(如胰岛素、各种前列腺素、生长激素等)、生长因子(如表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、神经生长因子、MSA等)、维生素、载体蛋白如转铁蛋白(铜蓝蛋白等)、微量元素(镉、硒等)、乙醇胺以及贴壁与展开因子(如昆布氨酸、纤维网素等)取代含血清培养基中的血清部分。这样,不但排除了血清的干扰,而且,还可以在更接近体内的条件下维持细胞的功能和活力。③基质。一般培养用的器皿都是塑料的或玻璃的,足可构成理想的培养细胞的基质以供贴壁之需。血清也能在培养瓶的底面形成一层由附着蛋白分子构成的吸附层,亦有助于细胞贴壁。对于某些细胞还需要在培养基中添加纤维网素、昆布氨酸、白明胶之类的贴壁因子以维持它们体外的生机或增殖力。 植物组织培养的培养基由植物生长发育所需的多种无机盐、有机营养物(氨基酸和糖类),生物活性物质(维生素类)、植物生长调节物质(生长素、细胞分裂素、赤霉素等)、天然提取物(椰子乳和酵母提取物等)所组成,也可以在培养基中加入琼基而成为固体培养基。 无论是动物的还是植物的组织培养基,其成分,特别是活性物质成分应随培养物和培养目的的不同而作适当的调整。 |
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