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1)  Hybridization principle
杂交原理
2)  in situ hybridization
原位杂交
1.
Expression of Pax3 gene in Chick Embryo spinal cord analyzed with the improved in situ hybridization;
应用改良的原位杂交方法分析Pax3基因在鸡胚脊髓中的表达
2.
Complex chromosomal aberrations detected by fluorescence in situ hybridization and their clinical significance in patients with myelodysplastic syndrome;
荧光原位杂交检测骨髓增生异常综合征患者染色体复杂核型变化及临床意义的研究
3.
Establishing of in situ hybridization method for the expression of dentin phosphoprotein mRNA;
牙本质磷蛋白mRNA原位杂交方法的建立
3)  in-situ hybridization
原位杂交
1.
A whole-mount in-situ hybridization study on expression profile of mCcd1 during mouse embryonic development;
整体原位杂交研究mCcd1在小鼠胚胎发育过程中的表达
2.
Methods: In-situ hybridization and immunohistochemistry were used to detect the expressions of CyclinE mRNA and CyclinE protein in 40 cases of colon carcinoma in various stages,and 10 colon adenoma,and 10 normal colon mucosa.
方法:采用原位杂交方法和免疫组化S-P法对40例结肠癌1、0例结肠腺瘤和10例结肠正常粘膜组织进行CyclinE mRNA和CyclinE蛋白的检测,同时结合临床病理资料进行分析。
3.
The hSAMP32 mRNA expression was detected by in-situ hybridization.
原位杂交检测hSAMP32mRNA在3组细胞中的表达。
4)  Immunohistochemistry
原位杂交
1.
Immunohistochemistry and in situ hybridization technique for undecalcified bone sections of human;
人类不脱钙骨组织的免疫组化与原位杂交
2.
The IgA nephropathy rats model were made by the method of oral BSA and intravenous SEB,the mRNA and protein expression of TGF-β_1 was measured by in-situ hybridisation and immunohistochemistry.
采用口服牛血清白蛋白及静注葡萄糖球菌肠毒素制成小鼠IgA肾病模型,免疫组化和原位杂交检测肾小球转化生长因子β1(TGFβ-1)蛋白和mRNA。
3.
Methods:Expressional level of nm23mRNA,p16 was detected in 72 human lung cancer samples and 23 normal tissues adjacent to cancer respectively,and their correlation with lymph node metastasis and the degree of cell differentiation was studied by immunohistochemistry (IHC) and in situ hybridization (ISH) methods on tissue microarray.
方法 :应用组织芯片技术 ,通过原位杂交和免疫组织化学方法对 72例人肺癌组织和 2 3例癌旁正常肺组织中nm2 3mRNA和p16的表达水平及其与肺癌分化程度、淋巴结转移的关系进行研究。
5)  ISH [英][ɪʃ]  [美][ɪʃ]
原位杂交
1.
A Convenient Non-radio ISH Method for Detection of Pancreatic Elastase Ⅱ mRNA;
一种简便的非放射性原位杂交法检测胰腺Ⅱ型弹性蛋白酶mRNA
2.
Using ISH to Study the Expression and Distribution of FcRn in the Small Intestine of the Piglet;
利用原位杂交技术研究仔猪小肠FcRn表达及分布规律
3.
Methods :ISH were used to determine the effect of Ganoderma appanatum polysaccharides GF on N-ras 、C-myc mRNA in mouse HepA tumor.
方法:应用地高辛标记探针原位杂交技术,检测树舌多糖GF对HepA瘤细胞中癌基因N-ras、C-myc mRNA丰度的影响。
6)  hybridization in situ
原位杂交
1.
Studies on Detection of Nosema bombycis by Hybridization in situ;
家蚕微孢子虫原位杂交诊断技术研究
2.
Studies on Detection of Microsporidia (Nosema Bombycis) by Hybridization in situ;
家蚕微孢子虫的原位杂交检测技术研究
3.
Applicable Values of Nested-PCR,Hybridization in situ and Immunohistochemistry Techniques in Diagnosis of Tuberculosis
巢式PCR、原位杂交、免疫组化技术在结核病诊断中的应用价值
补充资料:酵母双杂交系统原理

酵母双杂交系统由fields和song等首先在研究真核基因转录调控中建立。典型的真核生长转录因子, 如gal4、gcn4、等都含有二个不同的结构域: dna结合结构域(dna-binding domain)和转录激活结构域(transcription-activating domain)。前者可识别dna上的特异序列, 并使转录激活结构域定位于所调节的基因的上游, 转录激活结构域可同转录复合体的其他成分作用,启动它所调节的基因的转录。二个结构域不但可在其连接区适当部位打开,仍具有各自的功能。而且不同两结构域可重建发挥转录激活作用。酵母双杂交系统利用杂交基因通过激活报道基因的表达探测蛋白-蛋白的相互作用。主要有二类载体: a 含dna -binding domain的载体; b 含dna-activating domain的载体。上述二类载体在构建融合基因时, 测试蛋白基因与结构域基因必须在阅读框内融合。融合基因在报告株中表达,其表达产物只有定位于核诓拍芮ǜ婊虻淖肌@鏕al4-bd具有核定位序列(nuclear-localization sequence), 而gal4-ad没有。因此,在gal4-ad氨基端或羧基端应克隆来自sv40的t-抗原的一段序列作为核定位的序列。

双杂交系统的另一个重要的元件是报道株。报道株指经改造的、含报道基因(reporter gene)的重组质粒的宿主细胞。最常用的是酵母细胞, 酵母细胞作为报道株的酵母双杂交系统具有许多优点: 〈1〉 易于转化、便于回收扩增质粒。〈2〉具有可直接进行选择的标记基因和特征性报道基因。〈3〉酵母的内源性蛋白不易同来源于哺乳动物的蛋白结合。一般编码一个蛋白的基因融合到明确的转录调控因子的dna-结合结构域(如gal4-bd, lexa-bd); 另一个基因融合到转录激活结构域(如gal4-ad, vp16)。激活结构域融合基因转入表达结合结构域融合基因的酵母细胞系中,蛋白间的作用使得转录因子重建导致相邻的报道基因表达(如lacz),从而可分析蛋白间的结合作用。

酵母双杂交系统能在体内测定蛋白质的结合作用,具有高度敏感性。主要是由于:①采用高拷贝和强启动子的表达载体使杂合蛋白过量表达。②信号测定是在自然平衡浓度条件下进行, 而如免疫共沉淀等物理方法为达到此条件需进行多次洗涤,降低了信号强度。③杂交蛋白间稳定度可被激活结构域和结合结构域结合形成转录起始复合物而增强,后者又与启动子dna结合, 此三元复合体使其中各组分的结合趋于稳定。④通过mrna产生多种稳定的酶使信号放大。 同时, 酵母表型, x-gal及his3蛋白表达等检测方法均很敏感。

说明:补充资料仅用于学习参考,请勿用于其它任何用途。
参考词条