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1) three-plasmid system
三质粒表达系统
1.
Objective To construct the three-plasmid system of lentiviral vector in which the expression of the marker gene green flurosecent protein(GFP) is controlled by ubiquinone promoter (PUB), and to establish a packaging cell line in order to obtain the expression of GFP.
目的 构建以泛醌启动子 (PUB)驱动绿色荧光蛋白 (GFP)表达的慢病毒载体三质粒表达系统 ,并建立其包装细胞系获得GFP的表达。
2) expression vector
表达质粒
1.
PurposeThe expression vector pTYB102 was constructed and active expression of nattokinase gene in E.
目的构建大肠杆菌表达质粒pTYB10 2 ,实现纳豆激酶基因 (nattokinasegene)在大肠杆菌中高活性表达。
2.
Recombinant expression vector was constructed and sequenced after enzyme digestion.
方法 :采用RT -PCR技术 ,从正常人外周血单个核细胞中扩增编码CD1 5 8b的cDNA ,经酶切后将其克隆于pMBP -c表达质粒上 ,酶切和测序鉴定。
3.
The full-length cDNA fragment encoding human C1-INH was obtained by gene recombination techniques and a stable expression plasmid was constructed by inserting the human C1-INH cDNA into an efficient dicistronic expression vector pED.
利用基因工程手段获取编码人补体1抑制物（C1-inhibitor，C1-INH）的基因片段，将其插入双顺反子表达载体pED中，构建成功可在CHO细胞中有效表达人C1-INH的表达质粒。
3) Expression plasmid
表达质粒
1.
Construction and identification of siRNA expression plasmid aimed at UL49 gene of Marek′s disease virus RB1B strain;
马立克氏病病毒超强毒UL49基因siRNA表达质粒的构建与鉴定
2.
Sequence analysis and eukaryotic expression plasmid constructionof gE gene of pseudorabies virus strain MinA;
伪狂犬病病毒Min-A株gE基因序列分析及其真核表达质粒的构建
3.
Here, a expression plasmid that suitable for Agrobacterium-mediated transformation pUNDV was constructed, which carried fussion protein gene of Newcastle disease virus(NDV-F) under the control of ubiquitin(Ubi) promoter, the selectable marker hygromycin phosphotranferase gene(HPT) and the reporter glucuronidase gene(GUS).
以编码新城疫病毒融合蛋白(NDV-F)的基因为外源基因,以玉米泛素蛋白(Ubi)启动子为启动子熏以潮霉素磷酸转移酶穴HPT雪基因作为选择标记基因熏β-半乳糖苷酸酶(GUS)基因作为报告基因构建了适宜于农杆菌介导转化水稻的表达质粒pUNDV,并通过农杆菌介导转化水稻,获得了多株转基因植株。
4) plasmid expression
质粒表达
5) protein expression systems
蛋白质表达系统
1.
Recently,some new isotope protein labeling strategies and new protein expression systems have emerged as tools for studying large proteins by sol.
至今已发展的同位素标记技术和蛋白质表达系统已获得了广泛的应用,对蛋白质的核磁共振研究起到了巨大的推动作用。
6) Coexpression plasmid
共表达质粒
1.
AIM: To construct an eukaryotic coexpression plasmid pSLC-IRES-IL-2, and to express it in COS-7 cells.
目的:构建共表达质粒pSLC-IRES-IL-2,并在COS-7细胞中表达。
补充资料：甲醇酵母表达系统
甲醇酵母基因表达系统是一种最近发展迅速的外源蛋白质生产系统。甲醇酵母是可利用甲醇作为唯一碳源的酵母，主要有h.polymorpha、candida bodinii、pichia pastoris三种，其中pichia pastoris作为基因表达系统使用得最多、最广泛［1］。与以往的基因表达系统相比，它具有无可匹敌的高表达特性，已被认为是最具有发展前景的生产蛋白质的工具之一。 1. 外源蛋白质的基因在甲醇酵母中的高效表达 目前已有多种蛋白质的基因在该表达系统中克隆成功，包括蛋白酶、酶抑制剂、受体、单链抗体等(表1)。尽管各种外源蛋白质产生的水平不一，但各种蛋白质在甲醇酵母中的产生水平均为在细菌、昆虫或哺乳动物等表达系统中产量的10～100倍［2］。如表皮生长因子(egf)在酿酒酵母中的产量为7.4mg/l，而在甲醇酵母中为450mg/l，提高了60倍［3］。椐报道，外源蛋白质在甲醇酵母中的产量最高可达12g/l［9］。 2. 实现外源蛋白质高效产生的关键因素 2.1 表达载体 首先，甲醇酵母中没有稳定的质粒，所以其表达载体采用整合型质粒。利用醇氧化酶(甲醇代谢的关键酶)基因-1(aox1)的启动子(paox1)和转录终止子(3′aox1)构建成整合型表达载体。paox1是一个极强的启动子，醇氧化酶的产量最高可占甲醇酵母中可溶性蛋白质的30%［2］，所以能使外源蛋白质在它的控制下高效产生。其次，在载体中加入酿酒酵母的分泌信号和前导肽序列(α因子)构建分泌型载体，一方面可以减轻宿主细胞的代谢负荷，另一方面可以减少宿主细胞蛋白水解酶对外源蛋白质的降解，ppic9k、pmetαa、b、c均为此类载体。此外，使多拷贝目的基因整合入甲醇酵母染色体，形成多个表达单元，产生高产的菌株，此类载体有pao815、ppic3.5、ppic9等。 2.2 受体菌 在以葡萄糖或甘油为碳源的培养基上生长时，甲醇酵母中aox1基因的表达受到抑制，而在以甲醇为唯一碳源时，诱导基因表达，使外源蛋白质的产量更高。甲醇酵母适合高密度连续培养的条件，细胞干重达100g/l以上，蛋白质产量极高［14］。受体菌采用蛋白水解酶缺陷型，从而大大降低产物的降解。常用的甲醇酵母受体菌有gs115、km71、pmad11、pmad16等。 3. 应用前景 经过近几年的发展完善，甲醇酵母表达系统已日趋成熟，应用也日趋广泛。国内已有多篇在甲醇酵母中生产外源蛋白质成功的报道(表2)。美国invitrogen公司也已开发出多种新型的甲醇酵母表达系统试剂盒，如multi-copy pichia expression kit、easyselect pichia expression kit、pichia methanolia expression system等，利用甲醇酵母表达系统克隆一个外源基因已十分方便。相信随着对甲醇酵母研究的进一步深入，它在生产外源蛋白质方面将日益展示出诱人的前景。
说明：补充资料仅用于学习参考，请勿用于其它任何用途。
参考词条
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