分别从正常大鼠、糖尿病肾病大鼠、中药糖微康治疗的糖尿病肾病大鼠、西药开博通治疗的糖尿病肾病大鼠的胰组织中提取其基因组DNA ,用对DNA甲基化作用敏感的限制性核酸内切酶HpaⅡ和MspⅠ (为一组同裂酶 )进行限制性酶切 ;并进行染色质DNaseⅠ敏感性分析 。

从正常大鼠、糖尿病大鼠、中药糖微康治疗的糖尿病大鼠、西药开博通治疗的糖尿病大鼠的肾、胰等组织中提取出其基因组DNA ,应用对DNA甲基化作用敏感的限制性核酸内切酶HpaⅡ和MspⅠ (为一组同裂酶 )进行了限制性酶切图谱分析 ,结果表明 ,DNA甲基化作用的主要位点在CpG二核苷酸处 ,且“糖微康”在关闭患糖尿病后肾组织中被异常活化的基因的同时 ,还能活化糖尿病动物胰组织中处于静息状态的基因 。

DNA甲基化与自身免疫性疾病

芯片技术与肿瘤中DNA甲基化研究

营养与肿瘤表观遗传学关系的研究进展——DNA甲基化机制

目的:探讨叶酸缺乏对胎鼠宫内脑发育的影响,研究叶酸缺乏孕鼠子代脑组织基因组 DNA 甲基化水平的改变,为叶酸缺乏造成脑发育障碍提供分子水平的依据。

叶酸作为一碳单位携带分子,在机体内发挥着非常重要的作用,它所参与的甲基化作用与蛋白质的合成紧密相关,本文对叶酸影响蛋白质的合成过程做了比较全面的综述,旨在阐明叶酸在蛋白质合成各个阶段中的作用。

方法:构建SF2/ASF野生型和Arg93/97/109突变体质粒,在体外表达和纯化GST标签的PRMT1、SF2/ASF及其Arg突变体融合蛋白,以甲基化活性实验检测PRMT1对SF2/ASF的甲基化作用及其甲基化修饰位点,以免疫荧光实验观察甲基化修饰对SF2/ASF亚细胞定位的影响。

在此基础上,建立了一种简便、快速分析抗肿瘤药物对DNA甲基化酶活性的影响的方法,为筛选针对基因甲基化异常引起的恶性肿瘤的治疗药物提供了一种新的思路和方法。

用 3H标记的 S-腺苷酰 - L -甲硫氨酸 (3H- SAM)作为甲基供体 ,以同位素掺入法测定了正常大鼠、糖尿病肾病大鼠、中药“糖微康”治疗的糖尿病肾病大鼠、西药“开博通”治疗的糖尿病肾病大鼠的肝细胞的 DNA甲基化酶活性 ,并对从以上各组动物肝组织中提取的基因组 DNA分别进行 DNase 敏感性分析 。

通过3H甲基同位素参入法研究细胞 DNA甲基化酶活力 ,则发现在细胞分化过程中酶活力未见升高 。