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1) yeast expression system
酵母表达体系
1.
This paper reviews the recent advances in yeast expression systems used in recombinant protein drugs produced by gene engineering,such as the selection of yeast vector system and yeast expression strain, construction of multi-copy strain, the high yeast cell density culture, the recent situation of yeast system applied in expression gene,defect of yeast expression system and countermeasure,etc.
本文主要从酵母载体系统的选择、酵母表达宿主的选择、多拷贝菌株的构建、高密度发酵培养酵母细胞、应用酵母系统表达外源基因的研究现状、酵母表达系统的缺陷及对策等几个方面综述了近年来酵母表达体系在基因工程重组蛋白药物开发方面的研究进展。
2.
Objective: To establish the yeast expression system for oncostatin M (OSM).
目的 :构建抑瘤素M (oncostatinM ,OSM)的酵母表达体系。
2) Pichia pastoris expression system
酵母表达系统
3) yeast expression system
酵母表达系统
1.
Purpose To express recombined human heparin-binding neuritepromoting factor (HBNF) by yeast expression system and analyse its bio-activity.
目的 通过酵母表达系统表达重组人亲肝素性促轴突生长因子 (heparin bindingneuritepromotingfac tor ,HBNF)蛋白并检测其生物活性。
4) Pichia Pastoris expre ssion system
PichiaPastoris酵母表达系统
5) pPIC9K vector
pPIC9K酵母表达载体
1.
METHOD:A re comb inant expression plasmid pPIC 9K/hVEGF165 was constructed with pPIC9K vector and human VEGF 165 cDNA prepared from human tumor tissue,then transformed to yeas t host strain GS115 The positive transformants were screened out and cultured in flasks.
方法 :自人肿瘤组织中获取人VEGF1 65cDNA ,构建pPIC9K酵母表达载体 ,采用Pichia酵母真核表达系统表达目的蛋白。
6) yeast expression vector
酵母表达载体
1.
Construction of yeast expression vector and inducible expression of cDNA fragment of stilbene synthase in yeast;
葡萄芪合酶基因cDNA片段酵母表达载体的构建及其在酿酒酵母中的表达
2.
The yeast expression vectors construction of the barley yellow dwarf virus coat protein gene and the movement protein gene;
大麦黄矮病毒外壳蛋白基因和移动蛋白基因酵母表达载体的构建
3.
Through restrict endonuclase Sal I / Pst I,ligation,transformation,recombinant plasmids′ restrict identification and gene sequencing,yeast expression vectors pGBKT7-GPV-CP and pGBKT7-GPV-MP were constructed,used for expressing the bait fusion protein in yeast two-hybrid an.
根据已知的大麦黄矮病毒GPV株系的外壳蛋白(Coat Protein CP)和移动蛋白(Movement Protein MP)基因序列合成了CP、MP基因的上下游引物,通过PCR扩增获得含有目的基因的片段,经过Sal I和Pst I双酶切、连接、转化、重组质粒的酶切鉴定及基因测序,构建了酵母表达载体pGBKT7-GPV-CP和pGBKT7-GPV-MP,用于在酵母双杂交分析中表达诱饵融合蛋白,为进一步筛选小麦cDNA文库内与大麦黄矮病毒互作的寄主因子、克隆寄主因子、推测其种类和功能奠定了基础。
补充资料：甲醇酵母表达系统
甲醇酵母基因表达系统是一种最近发展迅速的外源蛋白质生产系统。甲醇酵母是可利用甲醇作为唯一碳源的酵母，主要有h.polymorpha、candida bodinii、pichia pastoris三种，其中pichia pastoris作为基因表达系统使用得最多、最广泛［1］。与以往的基因表达系统相比，它具有无可匹敌的高表达特性，已被认为是最具有发展前景的生产蛋白质的工具之一。 1. 外源蛋白质的基因在甲醇酵母中的高效表达 目前已有多种蛋白质的基因在该表达系统中克隆成功，包括蛋白酶、酶抑制剂、受体、单链抗体等(表1)。尽管各种外源蛋白质产生的水平不一，但各种蛋白质在甲醇酵母中的产生水平均为在细菌、昆虫或哺乳动物等表达系统中产量的10～100倍［2］。如表皮生长因子(egf)在酿酒酵母中的产量为7.4mg/l，而在甲醇酵母中为450mg/l，提高了60倍［3］。椐报道，外源蛋白质在甲醇酵母中的产量最高可达12g/l［9］。 2. 实现外源蛋白质高效产生的关键因素 2.1 表达载体 首先，甲醇酵母中没有稳定的质粒，所以其表达载体采用整合型质粒。利用醇氧化酶(甲醇代谢的关键酶)基因-1(aox1)的启动子(paox1)和转录终止子(3′aox1)构建成整合型表达载体。paox1是一个极强的启动子，醇氧化酶的产量最高可占甲醇酵母中可溶性蛋白质的30%［2］，所以能使外源蛋白质在它的控制下高效产生。其次，在载体中加入酿酒酵母的分泌信号和前导肽序列(α因子)构建分泌型载体，一方面可以减轻宿主细胞的代谢负荷，另一方面可以减少宿主细胞蛋白水解酶对外源蛋白质的降解，ppic9k、pmetαa、b、c均为此类载体。此外，使多拷贝目的基因整合入甲醇酵母染色体，形成多个表达单元，产生高产的菌株，此类载体有pao815、ppic3.5、ppic9等。 2.2 受体菌 在以葡萄糖或甘油为碳源的培养基上生长时，甲醇酵母中aox1基因的表达受到抑制，而在以甲醇为唯一碳源时，诱导基因表达，使外源蛋白质的产量更高。甲醇酵母适合高密度连续培养的条件，细胞干重达100g/l以上，蛋白质产量极高［14］。受体菌采用蛋白水解酶缺陷型，从而大大降低产物的降解。常用的甲醇酵母受体菌有gs115、km71、pmad11、pmad16等。 3. 应用前景 经过近几年的发展完善，甲醇酵母表达系统已日趋成熟，应用也日趋广泛。国内已有多篇在甲醇酵母中生产外源蛋白质成功的报道(表2)。美国invitrogen公司也已开发出多种新型的甲醇酵母表达系统试剂盒，如multi-copy pichia expression kit、easyselect pichia expression kit、pichia methanolia expression system等，利用甲醇酵母表达系统克隆一个外源基因已十分方便。相信随着对甲醇酵母研究的进一步深入，它在生产外源蛋白质方面将日益展示出诱人的前景。
说明：补充资料仅用于学习参考，请勿用于其它任何用途。
参考词条
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